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PF-382細胞

  • 更新時間:  2023-11-14
  • 產品型號:  
  • 簡單描述
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詳細介紹

PF-382細胞


二、細(xi)胞培養操作(zuo)

1) 復(fu)蘇細(xi)胞:以(yi)下細(xi)胞培(pei)養凍(dong)(dong)(dong)存處理僅供參考,具(ju)體(ti)操(cao)作(zuo)步驟(zou)以(yi)隨(sui)貨產品說明書(shu)為主。將含有1 mL細(xi)胞懸(xuan)液(ye)(ye)的凍(dong)(dong)(dong)存管在 37℃水浴中(zhong)迅速(su)搖晃(huang)解凍(dong)(dong)(dong),加(jia)4 mL培(pei)養基(ji)(ji)混合均勻(yun)。在1000 rpm條件下離心3 min,棄去上清液(ye)(ye),加(jia)1-2 mL培(pei)養基(ji)(ji)后吹勻(yun)。然后將所有細(xi)胞懸(xuan)液(ye)(ye)加(jia)入(ru)(ru)含適(shi)量培(pei)養基(ji)(ji)的培(pei)養瓶中(zhong)培(pei)養過夜(或將細(xi)胞懸(xuan)液(ye)(ye)加(jia)入(ru)(ru)10 cm皿(min)中(zhong),加(jia)入(ru)(ru)約8 mL培(pei)養基(ji)(ji),培(pei)養過夜)。第二天換液(ye)(ye)并檢查細(xi)胞密度。

2) 細胞(bao)傳代(dai):如果細胞(bao)密(mi)度達 80%-90%,即(ji)可(ke)進行傳代(dai)培養。

    a、棄去培養上清(qing),用不含鈣、鎂(mei)離子的PBS潤洗(xi)細胞1-2次。        

    b、加(jia)(jia)1 mL消化(hua)液(ye)(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yang)(yang)(yang)瓶中,使消化(hua)液(ye)浸潤所有細(xi)(xi)胞(bao),將培養(yang)(yang)(yang)瓶置于37℃培養(yang)(yang)(yang)箱中消化(hua)1-2 min(視細(xi)(xi)胞(bao)情況而(er)定),然后(hou)在顯微(wei)鏡(jing)下觀察細(xi)(xi)胞(bao)消化(hua)情況,若細(xi)(xi)胞(bao)大(da)部分變圓(yuan)并(bing)脫落,迅速(su)拿回(hui)操作臺(tai),輕敲幾(ji)下培養(yang)(yang)(yang)瓶后(hou)加(jia)(jia)2-3ml培養(yang)(yang)(yang)基終止(zhi)消化(hua)。輕輕打勻(yun)后(hou)裝入(ru)無(wu)菌(jun)離心管中,1000 rpm離心5 min,棄去上(shang)清液(ye),補加(jia)(jia)1-2 mL培養(yang)(yang)(yang)液(ye)后(hou)吹勻(yun)。        

     c、將細(xi)(xi)胞(bao)懸液(ye)按1:2比例(li)分到新的(de)含8 mL培(pei)養(yang)基的(de)新皿中(zhong)(zhong)或者瓶中(zhong)(zhong),置于培(pei)養(yang)箱中(zhong)(zhong)培(pei)養(yang)。 3) 細(xi)(xi)胞(bao)凍存(cun):待細(xi)(xi)胞(bao)生(sheng)長狀態良好時,可進行細(xi)(xi)胞(bao)凍存(cun)。下面 T25 瓶為(wei)例(li);a、收(shou)集細(xi)(xi)胞(bao)及(ji)細(xi)(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)液(ye),裝(zhuang)入無菌離心管中(zhong)(zhong),1000 rpm條件下離心4 min,棄去(qu)上(shang)清(qing)液(ye),用PBS清(qing)洗(xi)一遍,棄盡PBS,進行細(xi)(xi)胞(bao)計(ji)數(shu)。

     b、根(gen)據細(xi)胞(bao)數量加入(ru)無血清細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)(cun)液(ye),使(shi)細(xi)胞(bao)密度5×106~1×107/mL,輕(qing)輕(qing)混勻,每支(zhi)凍(dong)存(cun)(cun)管凍(dong)存(cun)(cun)1mL細(xi)胞(bao)懸液(ye),注(zhu)意凍(dong)存(cun)(cun)管做好標識。將凍(dong)存(cun)(cun)管放入(ru)-80℃冰箱,24 h后轉入(ru)液(ye)氮灌儲存(cun)(cun)。記錄凍(dong)存(cun)(cun)管位置以便下次拿取。  

三、培養注意事(shi)項

1. 收到細胞(bao)后(hou)首先觀察細胞(bao)瓶是否完好(hao),培養(yang)液(ye)是否有(you)漏液(ye)、渾濁等現(xian)象(xiang),若(ruo)有(you)上述現(xian)象(xiang) 發生請(qing)及時(shi)和我們聯(lian)系。

2. 仔細(xi)(xi)閱讀(du)細(xi)(xi)胞說明書,了解(jie)細(xi)(xi)胞相關信(xin)息,如(ru)細(xi)(xi)胞形(xing)態(tai)、所用(yong)培(pei)養(yang)基(ji)、血清(qing)比例(li)、所需(xu) 細(xi)(xi)胞因子等(deng),確保細(xi)(xi)胞培(pei)養(yang)條件(jian)一致,若由于培(pei)養(yang)條件(jian)不一致而導致細(xi)(xi)胞出現問題,責任由 客戶自行承擔。

3. 用 75%酒(jiu)精(jing)擦拭細(xi)胞(bao)瓶表(biao)面,顯微鏡(jing)下觀察細(xi)胞(bao)狀態。因運輸問題,部分細(xi)胞(bao)由于溫度 變化及劇烈碰(peng)亡破碎形成碎片,是正常現象。觀察好細(xi)胞(bao)狀態后,75%酒(jiu)精(jing)消毒(du)瓶壁(bi)將 T25 瓶置于 37℃培養箱放置 2-4h。

4. 貼(tie)壁細(xi)(xi)胞可以(yi)消化,懸浮細(xi)(xi)胞直接(jie)混勻收集細(xi)(xi)胞,900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min,棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細(xi)(xi)胞,再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min,用新鮮(xian)的培養基重懸 細(xi)(xi)胞,并(bing)接(jie)種(zhong)到新的培養瓶(ping)或(huo)培養皿中,置于培養箱中進行(xing)培養。

5. 請客戶用(yong)相同條件的培(pei)養基用(yong)于(yu)細胞培(pei)養。

6. 建議客(ke)戶收到細胞后(hou)前 3 天各拍幾(ji)張細胞照(zhao)片,記錄細胞狀態(tai),便于和我司(si)技(ji)(ji)術(shu)部溝通 交流。由于運輸的(de)(de)(de)原因,個別敏感細胞會出現不穩定的(de)(de)(de)情況,請及(ji)時和我們聯系,告知細胞 的(de)(de)(de)具體情況,以便我們的(de)(de)(de)技(ji)(ji)術(shu)人員跟蹤(zong)回(hui)訪直至問(wen)題解(jie)決。

7. 該細胞僅供(gong)科(ke)研使(shi)用。

8. 備注:運輸用(yong)(yong)的培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基 (灌液培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基) 不能再用(yong)(yong)來(lai)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)細(xi)胞,請換用(yong)(yong)按(an)照(zhao)說明書細(xi)胞培(pei)(pei) 養(yang)(yang)(yang)條件新配制的培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基來(lai)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)細(xi)胞。     收(shou)到(dao)細(xi)胞后(hou)第(di)一次傳代(dai)建議(yi) 1:2 傳代(dai)。

9. 注意:  1:2 傳代就是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個(ge) T25 瓶或者 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不(bu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個(ge)10cm 皿(min)。

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