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OV7細胞

  • 更新時間:  2023-11-14
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詳細介紹

OV7細胞


二、細(xi)胞培(pei)養操作

1) 復蘇細(xi)胞:以(yi)下細(xi)胞培養(yang)(yang)凍存(cun)處理僅供參考(kao),具體操作步(bu)驟以(yi)隨貨產(chan)品說明書為主。將(jiang)含(han)有(you)1 mL細(xi)胞懸液的(de)凍存(cun)管在 37℃水(shui)浴中(zhong)迅(xun)速搖(yao)晃解凍,加(jia)4 mL培養(yang)(yang)基(ji)(ji)混合均(jun)勻。在1000 rpm條件下離心3 min,棄(qi)去(qu)上(shang)清液,加(jia)1-2 mL培養(yang)(yang)基(ji)(ji)后吹勻。然后將(jiang)所有(you)細(xi)胞懸液加(jia)入(ru)含(han)適量培養(yang)(yang)基(ji)(ji)的(de)培養(yang)(yang)瓶中(zhong)培養(yang)(yang)過夜(或將(jiang)細(xi)胞懸液加(jia)入(ru)10 cm皿中(zhong),加(jia)入(ru)約8 mL培養(yang)(yang)基(ji)(ji),培養(yang)(yang)過夜)。第二天換液并檢查細(xi)胞密(mi)度。

2) 細胞傳代(dai):如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代(dai)培養。

    a、棄去培(pei)養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xi)胞1-2次。        

    b、加(jia)(jia)1 mL消(xiao)化(hua)液(ye)(ye)(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于(yu)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)瓶中,使消(xiao)化(hua)液(ye)(ye)浸潤所(suo)有(you)細(xi)胞,將(jiang)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)瓶置于(yu)37℃培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)箱中消(xiao)化(hua)1-2 min(視細(xi)胞情(qing)況而定),然后(hou)在顯微鏡下觀察細(xi)胞消(xiao)化(hua)情(qing)況,若(ruo)細(xi)胞大部分變圓并脫落,迅(xun)速拿回操(cao)作(zuo)臺,輕(qing)敲幾(ji)下培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)瓶后(hou)加(jia)(jia)2-3ml培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基終止消(xiao)化(hua)。輕(qing)輕(qing)打勻后(hou)裝(zhuang)入無菌離心管中,1000 rpm離心5 min,棄(qi)去上清液(ye)(ye),補加(jia)(jia)1-2 mL培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)液(ye)(ye)后(hou)吹(chui)勻。        

     c、將細(xi)(xi)胞(bao)(bao)懸液(ye)按1:2比(bi)例(li)分到新(xin)的含8 mL培(pei)養(yang)基(ji)的新(xin)皿中或者瓶中,置(zhi)于培(pei)養(yang)箱中培(pei)養(yang)。 3) 細(xi)(xi)胞(bao)(bao)凍存(cun):待細(xi)(xi)胞(bao)(bao)生長狀態(tai)良好時(shi),可進行細(xi)(xi)胞(bao)(bao)凍存(cun)。下面 T25 瓶為例(li);a、收(shou)集細(xi)(xi)胞(bao)(bao)及細(xi)(xi)胞(bao)(bao)培(pei)養(yang)液(ye),裝(zhuang)入無菌離心(xin)管中,1000 rpm條件下離心(xin)4 min,棄去上(shang)清(qing)液(ye),用PBS清(qing)洗一(yi)遍(bian),棄盡PBS,進行細(xi)(xi)胞(bao)(bao)計數。

     b、根據細(xi)胞(bao)(bao)數量加入(ru)(ru)無血清細(xi)胞(bao)(bao)凍存(cun)液(ye),使細(xi)胞(bao)(bao)密度5×106~1×107/mL,輕(qing)輕(qing)混勻,每支凍存(cun)管(guan)凍存(cun)1mL細(xi)胞(bao)(bao)懸液(ye),注意凍存(cun)管(guan)做好(hao)標(biao)識(shi)。將凍存(cun)管(guan)放入(ru)(ru)-80℃冰箱,24 h后轉入(ru)(ru)液(ye)氮灌儲存(cun)。記錄(lu)凍存(cun)管(guan)位置以便下(xia)次拿(na)取。  

三、培養注意事項(xiang)

1. 收(shou)到細胞后首先觀(guan)察細胞瓶是否完(wan)好,培(pei)養液是否有漏液、渾濁等現象,若有上(shang)述現象 發(fa)生請及時和(he)我(wo)們聯(lian)系。

2. 仔細(xi)閱讀細(xi)胞(bao)(bao)說明書,了解細(xi)胞(bao)(bao)相關信(xin)息,如細(xi)胞(bao)(bao)形態、所用培(pei)養基、血清比例、所需 細(xi)胞(bao)(bao)因子等,確保(bao)細(xi)胞(bao)(bao)培(pei)養條件一致,若由于培(pei)養條件不一致而導(dao)致細(xi)胞(bao)(bao)出現問題,責任由 客戶自行承擔(dan)。

3. 用 75%酒(jiu)精(jing)擦拭細胞(bao)瓶表面,顯微鏡下(xia)觀察細胞(bao)狀態(tai)。因運輸問題,部分細胞(bao)由于(yu)溫(wen)度 變化(hua)及(ji)劇烈碰亡破碎形成碎片,是正常現象。觀察好細胞(bao)狀態(tai)后,75%酒(jiu)精(jing)消毒瓶壁將 T25 瓶置(zhi)于(yu) 37℃培養(yang)箱(xiang)放置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁細胞可以消(xiao)化,懸(xuan)(xuan)浮細胞直接混勻收(shou)集(ji)細胞,900 rpm-1000 rpm 離心 3 min,棄上(shang) 清。加 5 mL PBS 重懸(xuan)(xuan)細胞,再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min,用新鮮(xian)的培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)基重懸(xuan)(xuan) 細胞,并(bing)接種到新的培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)瓶或培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)皿中(zhong),置于培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)箱(xiang)中(zhong)進行培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)。

5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。

6. 建議(yi)客戶(hu)收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照(zhao)片,記錄細胞狀態,便于和我(wo)司技(ji)術部(bu)溝(gou)通 交流。由(you)于運輸的(de)原(yuan)因,個別(bie)敏感(gan)細胞會出現不(bu)穩定(ding)的(de)情(qing)況(kuang),請及時和我(wo)們聯系,告知細胞 的(de)具(ju)體情(qing)況(kuang),以(yi)便我(wo)們的(de)技(ji)術人員跟蹤回訪直至問(wen)題解(jie)決。

7. 該細胞僅(jin)供科研使用。

8. 備注:運輸用的培(pei)(pei)(pei)養基 (灌液培(pei)(pei)(pei)養基) 不能再(zai)用來培(pei)(pei)(pei)養細胞(bao),請換用按照說明書細胞(bao)培(pei)(pei)(pei) 養條(tiao)件新配制的培(pei)(pei)(pei)養基來培(pei)(pei)(pei)養細胞(bao)。     收到細胞(bao)后(hou)第一次傳代建議(yi) 1:2 傳代。

9. 注(zhu)意:  1:2 傳(chuan)(chuan)代就是 1 個(ge)(ge) T25 瓶傳(chuan)(chuan) 2 個(ge)(ge) T25 瓶或者 2 個(ge)(ge) 6cm 皿。不是 1 個(ge)(ge) T25 瓶傳(chuan)(chuan) 2 個(ge)(ge)10cm 皿。

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