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PK-1細胞

  • 更新時間:  2023-11-14
  • 產品型號:  
  • 簡單描述
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詳細(xi)介紹

PK-1細胞

二、細胞培養(yang)操作

1) 復蘇細(xi)胞:以下細(xi)胞培(pei)養凍存處理(li)僅(jin)供(gong)參考,具體操作步驟以隨(sui)貨產品說(shuo)明(ming)書(shu)為主。將含有1 mL細(xi)胞懸液(ye)的凍存管在(zai) 37℃水浴中迅速搖晃(huang)解凍,加(jia)4 mL培(pei)養基混合均勻。在(zai)1000 rpm條件下離心3 min,棄去上清液(ye),加(jia)1-2 mL培(pei)養基后吹勻。然后將所有細(xi)胞懸液(ye)加(jia)入(ru)(ru)含適量(liang)培(pei)養基的培(pei)養瓶中培(pei)養過(guo)(guo)夜(ye)(或(huo)將細(xi)胞懸液(ye)加(jia)入(ru)(ru)10 cm皿中,加(jia)入(ru)(ru)約(yue)8 mL培(pei)養基,培(pei)養過(guo)(guo)夜(ye))。第二天換(huan)液(ye)并檢查細(xi)胞密度。

2) 細胞(bao)傳(chuan)代(dai):如(ru)果(guo)細胞(bao)密度達(da) 80%-90%,即(ji)可進行傳(chuan)代(dai)培養。

    a、棄(qi)去培養(yang)上(shang)清,用(yong)不含鈣、鎂離子(zi)的PBS潤洗細胞1-2次(ci)。        

    b、加1 mL消化液(ye)(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培(pei)(pei)養瓶中(zhong),使消化液(ye)浸潤所(suo)有細胞(bao)(bao),將培(pei)(pei)養瓶置于37℃培(pei)(pei)養箱中(zhong)消化1-2 min(視細胞(bao)(bao)情(qing)況而定(ding)),然后(hou)在顯微鏡(jing)下觀察細胞(bao)(bao)消化情(qing)況,若細胞(bao)(bao)大部分變圓并脫落(luo),迅速(su)拿回操作臺(tai),輕敲(qiao)幾(ji)下培(pei)(pei)養瓶后(hou)加2-3ml培(pei)(pei)養基(ji)終止(zhi)消化。輕輕打(da)勻(yun)后(hou)裝入(ru)無菌離心(xin)管中(zhong),1000 rpm離心(xin)5 min,棄去上(shang)清液(ye),補(bu)加1-2 mL培(pei)(pei)養液(ye)后(hou)吹勻(yun)。        

     c、將細(xi)胞(bao)懸液(ye)按1:2比例分到新的含8 mL培(pei)(pei)養(yang)基(ji)的新皿(min)中或者瓶中,置(zhi)于(yu)培(pei)(pei)養(yang)箱(xiang)中培(pei)(pei)養(yang)。 3) 細(xi)胞(bao)凍存:待細(xi)胞(bao)生長狀態(tai)良好時(shi),可進(jin)(jin)行(xing)(xing)細(xi)胞(bao)凍存。下(xia)面 T25 瓶為(wei)例;a、收集(ji)細(xi)胞(bao)及(ji)細(xi)胞(bao)培(pei)(pei)養(yang)液(ye),裝入無菌離心(xin)管中,1000 rpm條件(jian)下(xia)離心(xin)4 min,棄去(qu)上(shang)清液(ye),用PBS清洗(xi)一遍,棄盡(jin)PBS,進(jin)(jin)行(xing)(xing)細(xi)胞(bao)計(ji)數。

     b、根據(ju)細胞(bao)數(shu)量加入無血清細胞(bao)凍(dong)(dong)(dong)存(cun)液(ye),使(shi)細胞(bao)密度5×106~1×107/mL,輕輕混勻,每支凍(dong)(dong)(dong)存(cun)管(guan)(guan)凍(dong)(dong)(dong)存(cun)1mL細胞(bao)懸(xuan)液(ye),注意凍(dong)(dong)(dong)存(cun)管(guan)(guan)做好(hao)標識。將凍(dong)(dong)(dong)存(cun)管(guan)(guan)放入-80℃冰箱,24 h后轉入液(ye)氮灌儲存(cun)。記錄凍(dong)(dong)(dong)存(cun)管(guan)(guan)位(wei)置以便下次拿取。  

三、培養(yang)注意事項

1. 收到細(xi)胞后(hou)首先觀察細(xi)胞瓶是否完好,培養液(ye)(ye)是否有漏液(ye)(ye)、渾濁等現象,若有上述(shu)現象 發(fa)生請及(ji)時(shi)和我(wo)們(men)聯系。

2. 仔細(xi)閱讀(du)細(xi)胞(bao)說明書,了解細(xi)胞(bao)相(xiang)關信息,如(ru)細(xi)胞(bao)形態、所(suo)用培養基、血清(qing)比例(li)、所(suo)需 細(xi)胞(bao)因子等(deng),確保(bao)細(xi)胞(bao)培養條(tiao)件(jian)一致(zhi),若(ruo)由于培養條(tiao)件(jian)不(bu)一致(zhi)而導致(zhi)細(xi)胞(bao)出現問題,責任由 客戶自行承擔(dan)。

3. 用 75%酒(jiu)(jiu)精(jing)擦拭(shi)細(xi)(xi)胞瓶(ping)(ping)表面,顯(xian)微鏡下(xia)觀察細(xi)(xi)胞狀(zhuang)態。因運輸問題,部分細(xi)(xi)胞由(you)于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成(cheng)碎片,是正(zheng)常現象。觀察好細(xi)(xi)胞狀(zhuang)態后,75%酒(jiu)(jiu)精(jing)消毒瓶(ping)(ping)壁將 T25 瓶(ping)(ping)置于 37℃培養箱(xiang)放置 2-4h。

4. 貼壁細(xi)胞(bao)可以消(xiao)化,懸(xuan)(xuan)浮細(xi)胞(bao)直接(jie)混(hun)勻收集細(xi)胞(bao),900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min,棄(qi)上 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)(xuan)細(xi)胞(bao),再 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min,用(yong)新鮮的培(pei)(pei)養(yang)基重(zhong)懸(xuan)(xuan) 細(xi)胞(bao),并接(jie)種到(dao)新的培(pei)(pei)養(yang)瓶或培(pei)(pei)養(yang)皿(min)中(zhong),置于培(pei)(pei)養(yang)箱中(zhong)進行培(pei)(pei)養(yang)。

5. 請客戶(hu)用(yong)相同(tong)條(tiao)件的培(pei)養基用(yong)于細胞培(pei)養。

6. 建(jian)議客戶收到(dao)細胞(bao)(bao)后前 3 天各(ge)拍幾張細胞(bao)(bao)照片,記錄細胞(bao)(bao)狀(zhuang)態,便于(yu)和我司(si)技(ji)術(shu)部溝通 交(jiao)流。由于(yu)運輸的(de)(de)原因,個(ge)別敏感細胞(bao)(bao)會出現(xian)不穩定的(de)(de)情況,請及時(shi)和我們聯系,告知(zhi)細胞(bao)(bao) 的(de)(de)具體情況,以便我們的(de)(de)技(ji)術(shu)人員跟蹤回訪直至(zhi)問(wen)題解(jie)決。

7. 該細(xi)胞僅供科(ke)研(yan)使用。

8. 備注:運輸用的(de)(de)培(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)基(ji) (灌液培(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)基(ji)) 不能再用來培(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)細(xi)(xi)胞(bao),請換(huan)用按照說(shuo)明書細(xi)(xi)胞(bao)培(pei)(pei)(pei)(pei) 養(yang)(yang)條件新配制的(de)(de)培(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)基(ji)來培(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)細(xi)(xi)胞(bao)。     收到細(xi)(xi)胞(bao)后第一次(ci)傳代建議 1:2 傳代。

9. 注意(yi):  1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個 T25 瓶(ping)或者 2 個 6cm 皿(min)(min)。不是 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個10cm 皿(min)(min)。


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