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PE/CA-PJ49細胞

  • 更新時間:  2023-11-14
  • 產品型號:  
  • 簡單描述
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詳(xiang)細介紹(shao)

PE/CA-PJ49細胞


二、細胞培養操作(zuo)

1) 復蘇細胞(bao)(bao):以下細胞(bao)(bao)培(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)凍(dong)存處理僅供參考,具體操作步驟以隨貨產品(pin)說明(ming)書為主。將(jiang)含有1 mL細胞(bao)(bao)懸液(ye)的(de)凍(dong)存管在 37℃水浴中(zhong)迅速搖晃解凍(dong),加4 mL培(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)基(ji)混(hun)合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min,棄(qi)去(qu)上清(qing)液(ye),加1-2 mL培(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)基(ji)后(hou)吹勻。然后(hou)將(jiang)所(suo)有細胞(bao)(bao)懸液(ye)加入(ru)(ru)含適量(liang)培(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)基(ji)的(de)培(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)瓶中(zhong)培(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)過夜(或將(jiang)細胞(bao)(bao)懸液(ye)加入(ru)(ru)10 cm皿中(zhong),加入(ru)(ru)約8 mL培(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)基(ji),培(pei)(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)過夜)。第二天換液(ye)并檢(jian)查細胞(bao)(bao)密度(du)。

2) 細胞傳(chuan)代:如果細胞密(mi)度(du)達 80%-90%,即可(ke)進行傳(chuan)代培養。

    a、棄(qi)去(qu)培養上清(qing),用不含鈣、鎂離子(zi)的PBS潤(run)洗細(xi)胞1-2次。        

    b、加1 mL消(xiao)(xiao)化液(ye)(ye)(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于(yu)培養(yang)(yang)瓶中(zhong)(zhong),使消(xiao)(xiao)化液(ye)(ye)浸潤所(suo)有細(xi)胞(bao),將培養(yang)(yang)瓶置于(yu)37℃培養(yang)(yang)箱中(zhong)(zhong)消(xiao)(xiao)化1-2 min(視(shi)細(xi)胞(bao)情(qing)況而定),然后在(zai)顯(xian)微(wei)鏡下觀察(cha)細(xi)胞(bao)消(xiao)(xiao)化情(qing)況,若細(xi)胞(bao)大部分變(bian)圓并脫落,迅速(su)拿回操作臺,輕敲幾下培養(yang)(yang)瓶后加2-3ml培養(yang)(yang)基終止消(xiao)(xiao)化。輕輕打勻后裝入無菌(jun)離心(xin)管中(zhong)(zhong),1000 rpm離心(xin)5 min,棄(qi)去上清液(ye)(ye),補加1-2 mL培養(yang)(yang)液(ye)(ye)后吹勻。        

     c、將細(xi)胞(bao)(bao)懸液(ye)按1:2比例分(fen)到新的含(han)8 mL培(pei)養(yang)基的新皿(min)中或者瓶中,置于培(pei)養(yang)箱中培(pei)養(yang)。 3) 細(xi)胞(bao)(bao)凍存:待細(xi)胞(bao)(bao)生長狀態良(liang)好時,可進(jin)行細(xi)胞(bao)(bao)凍存。下面 T25 瓶為(wei)例;a、收(shou)集細(xi)胞(bao)(bao)及(ji)細(xi)胞(bao)(bao)培(pei)養(yang)液(ye),裝入無菌離(li)心管中,1000 rpm條件下離(li)心4 min,棄去上清(qing)液(ye),用PBS清(qing)洗一遍(bian),棄盡PBS,進(jin)行細(xi)胞(bao)(bao)計數。

     b、根據細(xi)胞數量(liang)加入無血(xue)清(qing)細(xi)胞凍(dong)存(cun)液(ye),使(shi)細(xi)胞密(mi)度(du)5×106~1×107/mL,輕輕混勻,每支凍(dong)存(cun)管(guan)(guan)凍(dong)存(cun)1mL細(xi)胞懸液(ye),注意(yi)凍(dong)存(cun)管(guan)(guan)做好(hao)標識。將(jiang)凍(dong)存(cun)管(guan)(guan)放入-80℃冰(bing)箱,24 h后(hou)轉入液(ye)氮灌(guan)儲存(cun)。記錄凍(dong)存(cun)管(guan)(guan)位置以便下次(ci)拿取。  

三、培養(yang)注意事項

1. 收到細胞后(hou)首先觀察細胞瓶是(shi)(shi)否完好,培養液(ye)(ye)是(shi)(shi)否有漏(lou)液(ye)(ye)、渾濁(zhuo)等現(xian)象,若有上述(shu)現(xian)象 發生請及時和我們(men)聯系。

2. 仔細(xi)(xi)閱(yue)讀細(xi)(xi)胞說明書,了解細(xi)(xi)胞相(xiang)關信(xin)息,如細(xi)(xi)胞形(xing)態、所(suo)用培(pei)養基、血清比例、所(suo)需 細(xi)(xi)胞因子等,確保細(xi)(xi)胞培(pei)養條件一致(zhi)(zhi),若由(you)于培(pei)養條件不一致(zhi)(zhi)而(er)導(dao)致(zhi)(zhi)細(xi)(xi)胞出現問題,責任由(you) 客戶自行承擔。

3. 用 75%酒精(jing)擦拭細(xi)(xi)胞(bao)瓶表面,顯微鏡下(xia)觀察細(xi)(xi)胞(bao)狀態。因運輸問題,部分細(xi)(xi)胞(bao)由于(yu)溫度 變化及劇烈(lie)碰亡破碎形成碎片(pian),是(shi)正常現象。觀察好細(xi)(xi)胞(bao)狀態后,75%酒精(jing)消(xiao)毒(du)瓶壁將 T25 瓶置于(yu) 37℃培養箱放置 2-4h。

4. 貼(tie)壁細胞(bao)可以(yi)消化,懸浮細胞(bao)直接混(hun)勻收集細胞(bao),900 rpm-1000 rpm 離心 3 min,棄上 清(qing)。加 5 mL PBS 重(zhong)懸細胞(bao),再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min,用新鮮的(de)培(pei)(pei)養基重(zhong)懸 細胞(bao),并接種(zhong)到新的(de)培(pei)(pei)養瓶或培(pei)(pei)養皿中,置于培(pei)(pei)養箱中進行培(pei)(pei)養。

5. 請客戶用相同條(tiao)件的(de)培養(yang)基(ji)用于細胞培養(yang)。

6. 建議客戶(hu)收(shou)到細(xi)胞(bao)后前(qian) 3 天各(ge)拍幾張(zhang)細(xi)胞(bao)照片,記(ji)錄細(xi)胞(bao)狀態,便于和我(wo)司技(ji)術(shu)部溝通 交流。由于運輸的(de)(de)原因,個別敏感(gan)細(xi)胞(bao)會出(chu)現(xian)不穩定的(de)(de)情況,請及時和我(wo)們聯系,告知細(xi)胞(bao) 的(de)(de)具體(ti)情況,以便我(wo)們的(de)(de)技(ji)術(shu)人員跟蹤回訪直至問題解決(jue)。

7. 該細(xi)胞僅供科研使(shi)用。

8. 備注:運(yun)輸(shu)用的(de)培(pei)(pei)養(yang)基 (灌液培(pei)(pei)養(yang)基) 不能再用來(lai)(lai)培(pei)(pei)養(yang)細胞(bao),請換用按照(zhao)說明(ming)書(shu)細胞(bao)培(pei)(pei) 養(yang)條件新配制的(de)培(pei)(pei)養(yang)基來(lai)(lai)培(pei)(pei)養(yang)細胞(bao)。     收到細胞(bao)后第一次傳代(dai)建議 1:2 傳代(dai)。

9. 注意:  1:2 傳代就是 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個(ge) T25 瓶或(huo)者 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不是 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個(ge)10cm 皿(min)。

公司正(zheng)在出售的產品:

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