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OVMANA細胞

  • 更新時間:  2023-11-14
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  • 簡單描述
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詳細介紹(shao)

OVMANA細胞


二、細胞培養(yang)操作

1) 復(fu)蘇細(xi)(xi)胞(bao):以下(xia)細(xi)(xi)胞(bao)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)凍存(cun)處(chu)理僅供參考,具(ju)體操作步驟以隨貨(huo)產(chan)品(pin)說(shuo)明書為主。將(jiang)含(han)(han)有(you)1 mL細(xi)(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)的(de)凍存(cun)管(guan)在 37℃水浴中(zhong)(zhong)迅速搖(yao)晃解凍,加4 mL培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)混(hun)合均勻(yun)。在1000 rpm條件下(xia)離(li)心3 min,棄(qi)去(qu)上清液(ye),加1-2 mL培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)后(hou)吹勻(yun)。然(ran)后(hou)將(jiang)所有(you)細(xi)(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)加入含(han)(han)適量培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)的(de)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)瓶(ping)中(zhong)(zhong)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)過夜(或將(jiang)細(xi)(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)加入10 cm皿中(zhong)(zhong),加入約8 mL培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji),培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)過夜)。第(di)二天換液(ye)并檢(jian)查(cha)細(xi)(xi)胞(bao)密度。

2) 細(xi)胞(bao)傳代:如果細(xi)胞(bao)密度達 80%-90%,即(ji)可進行傳代培養。

    a、棄去培養上(shang)清,用不含鈣、鎂離(li)子(zi)的PBS潤洗細胞1-2次。        

    b、加1 mL消化(hua)液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yang)瓶(ping)(ping)中(zhong),使消化(hua)液浸潤所有細(xi)胞,將培養(yang)瓶(ping)(ping)置于37℃培養(yang)箱(xiang)中(zhong)消化(hua)1-2 min(視細(xi)胞情況(kuang)而定),然(ran)后在顯微(wei)鏡下觀察(cha)細(xi)胞消化(hua)情況(kuang),若細(xi)胞大(da)部分變(bian)圓并脫落(luo),迅速拿(na)回操作臺,輕敲幾(ji)下培養(yang)瓶(ping)(ping)后加2-3ml培養(yang)基終止消化(hua)。輕輕打勻后裝入(ru)無(wu)菌離心管中(zhong),1000 rpm離心5 min,棄去上清(qing)液,補加1-2 mL培養(yang)液后吹勻。        

     c、將細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)懸(xuan)液按1:2比例(li)(li)分到(dao)新的含8 mL培(pei)養基(ji)的新皿中(zhong)或(huo)者瓶中(zhong),置于培(pei)養箱中(zhong)培(pei)養。 3) 細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)凍(dong)存(cun):待細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)生長(chang)狀態良(liang)好時,可進行(xing)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)凍(dong)存(cun)。下面 T25 瓶為例(li)(li);a、收(shou)集細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)及細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)培(pei)養液,裝入無(wu)菌離心管中(zhong),1000 rpm條件下離心4 min,棄去上清液,用PBS清洗一(yi)遍,棄盡PBS,進行(xing)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)計數(shu)。

     b、根據細胞數量加(jia)入無血清細胞凍存(cun)液(ye),使細胞密度5×106~1×107/mL,輕輕混勻,每支凍存(cun)管凍存(cun)1mL細胞懸液(ye),注意(yi)凍存(cun)管做好標識。將(jiang)凍存(cun)管放入-80℃冰箱,24 h后轉入液(ye)氮灌儲(chu)存(cun)。記錄凍存(cun)管位置以(yi)便(bian)下次(ci)拿取。  

三、培(pei)養注意事項

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是(shi)否完(wan)好(hao),培養液(ye)是(shi)否有漏液(ye)、渾濁等現象,若有上(shang)述現象 發生請及(ji)時(shi)和我們(men)聯系(xi)。

2. 仔細(xi)(xi)閱(yue)讀細(xi)(xi)胞(bao)說(shuo)明書,了解細(xi)(xi)胞(bao)相(xiang)關信(xin)息,如細(xi)(xi)胞(bao)形態、所用培養基、血清比例(li)、所需 細(xi)(xi)胞(bao)因(yin)子等,確保細(xi)(xi)胞(bao)培養條(tiao)(tiao)件(jian)(jian)一致,若(ruo)由于培養條(tiao)(tiao)件(jian)(jian)不一致而(er)導致細(xi)(xi)胞(bao)出現問題(ti),責任由 客戶(hu)自行承擔。

3. 用 75%酒(jiu)精擦拭細胞瓶表面,顯微(wei)鏡下觀(guan)察(cha)(cha)細胞狀(zhuang)態(tai)。因運輸問題,部分細胞由(you)于(yu)溫度 變化及劇烈碰亡破碎形(xing)成碎片,是正常現象。觀(guan)察(cha)(cha)好細胞狀(zhuang)態(tai)后,75%酒(jiu)精消毒瓶壁將 T25 瓶置于(yu) 37℃培養箱放置 2-4h。

4. 貼壁(bi)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)可以消化(hua),懸(xuan)浮細(xi)(xi)(xi)胞(bao)直接混勻收集(ji)細(xi)(xi)(xi)胞(bao),900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin)(xin) 3 min,棄上(shang) 清。加(jia) 5 mL PBS 重懸(xuan)細(xi)(xi)(xi)胞(bao),再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin)(xin) 3 min,用(yong)新鮮的培(pei)(pei)養(yang)基重懸(xuan) 細(xi)(xi)(xi)胞(bao),并(bing)接種(zhong)到新的培(pei)(pei)養(yang)瓶或培(pei)(pei)養(yang)皿中,置(zhi)于培(pei)(pei)養(yang)箱(xiang)中進行培(pei)(pei)養(yang)。

5. 請客戶用相(xiang)同條件的培(pei)養基用于(yu)細胞培(pei)養。

6. 建議(yi)客戶收到細(xi)(xi)胞后前 3 天各拍(pai)幾張細(xi)(xi)胞照(zhao)片,記錄細(xi)(xi)胞狀態,便于和我司技術部溝通 交流。由于運輸的原因,個(ge)別敏感細(xi)(xi)胞會(hui)出現不穩定的情(qing)況(kuang),請及時和我們(men)聯系,告知細(xi)(xi)胞 的具體情(qing)況(kuang),以便我們(men)的技術人(ren)員跟(gen)蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研(yan)使用。

8. 備(bei)注:運(yun)輸用的培(pei)養(yang)基 (灌(guan)液培(pei)養(yang)基) 不能再用來培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao),請換用按照說明書細(xi)胞(bao)培(pei) 養(yang)條件新配制的培(pei)養(yang)基來培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)。     收到(dao)細(xi)胞(bao)后(hou)第一(yi)次傳代建議(yi) 1:2 傳代。

9. 注意:  1:2 傳(chuan)代就(jiu)是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個 T25 瓶(ping)或者 2 個 6cm 皿。不是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個10cm 皿。

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