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大鼠肝細胞瘤

  • 更新時間:  2023-11-12
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詳細介紹

大鼠肝細胞瘤

二(er)、細胞培養操作

1) 復蘇細(xi)(xi)胞(bao):以下細(xi)(xi)胞(bao)培(pei)養凍(dong)存處理(li)僅供(gong)參(can)考,具體(ti)操(cao)作步驟以隨貨產品(pin)說明書為主。將含(han)有1 mL細(xi)(xi)胞(bao)懸液(ye)的凍(dong)存管在(zai) 37℃水浴中迅速(su)搖晃(huang)解凍(dong),加(jia)(jia)(jia)4 mL培(pei)養基(ji)(ji)(ji)混合均勻。在(zai)1000 rpm條件下離心(xin)3 min,棄去上(shang)清液(ye),加(jia)(jia)(jia)1-2 mL培(pei)養基(ji)(ji)(ji)后(hou)吹(chui)勻。然后(hou)將所(suo)有細(xi)(xi)胞(bao)懸液(ye)加(jia)(jia)(jia)入含(han)適量培(pei)養基(ji)(ji)(ji)的培(pei)養瓶中培(pei)養過夜(ye)(或將細(xi)(xi)胞(bao)懸液(ye)加(jia)(jia)(jia)入10 cm皿中,加(jia)(jia)(jia)入約8 mL培(pei)養基(ji)(ji)(ji),培(pei)養過夜(ye))。第二天換液(ye)并檢查細(xi)(xi)胞(bao)密度。

2) 細胞(bao)傳(chuan)代(dai):如果細胞(bao)密度達 80%-90%,即可進行傳(chuan)代(dai)培養。

 a、棄(qi)去培養上清,用不含鈣(gai)、鎂離子的PBS潤洗細(xi)胞(bao)1-2次。        

 b、加(jia)1 mL消(xiao)化液(ye)(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培(pei)養瓶中,使消(xiao)化液(ye)浸潤所有細(xi)胞,將培(pei)養瓶置(zhi)于37℃培(pei)養箱中消(xiao)化1-2 min(視(shi)細(xi)胞情況而定),然(ran)后在顯(xian)微(wei)鏡下觀察(cha)細(xi)胞消(xiao)化情況,若(ruo)細(xi)胞大部分(fen)變圓并脫落,迅速拿(na)回(hui)操作臺,輕(qing)敲(qiao)幾下培(pei)養瓶后加(jia)2-3ml培(pei)養基終(zhong)止消(xiao)化。輕(qing)輕(qing)打勻后裝入無(wu)菌(jun)離心管中,1000 rpm離心5 min,棄去上清液(ye),補加(jia)1-2 mL培(pei)養液(ye)后吹勻。        

 c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培(pei)養(yang)基的新皿中(zhong)或者瓶(ping)中(zhong),置于培(pei)養(yang)箱中(zhong)培(pei)養(yang)。
3) 細胞(bao)(bao)凍(dong)存(cun):待細胞(bao)(bao)生長狀態良好時(shi),可(ke)進行細胞(bao)(bao)凍(dong)存(cun)。下面 T25 瓶(ping)為(wei)例;
a、收集(ji)細(xi)胞(bao)及細(xi)胞(bao)培養液,裝入(ru)無菌離心(xin)管中,1000 rpm條件下離心(xin)4 min,棄去(qu)上清(qing)(qing)液,用(yong)PBS清(qing)(qing)洗一遍(bian),棄盡PBS,進(jin)行細(xi)胞(bao)計數。

 b、根據細胞數量加入(ru)無血清細胞凍(dong)(dong)(dong)存(cun)液,使細胞密(mi)度5×106~1×107/mL,輕(qing)輕(qing)混勻,每支凍(dong)(dong)(dong)存(cun)管凍(dong)(dong)(dong)存(cun)1mL細胞懸液,注(zhu)意凍(dong)(dong)(dong)存(cun)管做好標(biao)識。將凍(dong)(dong)(dong)存(cun)管放入(ru)-80℃冰箱,24 h后轉入(ru)液氮灌儲存(cun)。記錄凍(dong)(dong)(dong)存(cun)管位置以(yi)便下(xia)次拿取。  

三、培養注意事項

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完(wan)好,培養(yang)液是否有漏液、渾濁等現(xian)象,若(ruo)有上(shang)述現(xian)象 發(fa)生請及時和我們(men)聯(lian)系。

2. 仔細(xi)閱讀細(xi)胞(bao)說明書,了解細(xi)胞(bao)相關信息,如細(xi)胞(bao)形態、所用培養(yang)(yang)基、血清比例、所需 細(xi)胞(bao)因子等,確保細(xi)胞(bao)培養(yang)(yang)條件(jian)一致(zhi),若由于培養(yang)(yang)條件(jian)不一致(zhi)而(er)導致(zhi)細(xi)胞(bao)出現(xian)問題,責任由 客戶自行承(cheng)擔。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精(jing)擦拭細胞瓶表面,顯微(wei)鏡(jing)下觀察細胞狀(zhuang)態。因運輸問題,部分細胞由于溫度(du) 變化(hua)及劇(ju)烈碰亡破碎(sui)形成碎(sui)片,是(shi)正常(chang)現象(xiang)。觀察好細胞狀(zhuang)態后,75%酒(jiu)精(jing)消(xiao)毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培(pei)養(yang)箱放置 2-4h。

4. 貼壁細(xi)(xi)胞可以(yi)消(xiao)化,懸浮細(xi)(xi)胞直接混勻收集(ji)細(xi)(xi)胞,900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min,棄上(shang) 清。加(jia) 5 mL PBS 重懸細(xi)(xi)胞,再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min,用新鮮的(de)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)重懸 細(xi)(xi)胞,并(bing)接種到(dao)新的(de)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)瓶(ping)或(huo)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)皿中(zhong),置(zhi)于培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)箱中(zhong)進行培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)。

5. 請客戶(hu)用相同(tong)條件(jian)的培養基用于細胞培養。

6. 建(jian)議(yi)客戶收到細(xi)胞(bao)(bao)后(hou)前 3 天各拍幾張(zhang)細(xi)胞(bao)(bao)照片,記錄(lu)細(xi)胞(bao)(bao)狀態,便于(yu)(yu)和我司技(ji)術部溝通 交流。由于(yu)(yu)運輸的原因,個別敏(min)感細(xi)胞(bao)(bao)會出現不穩定(ding)的情(qing)況,請及時(shi)和我們聯系,告知細(xi)胞(bao)(bao) 的具體(ti)情(qing)況,以(yi)便我們的技(ji)術人員(yuan)跟(gen)蹤回訪(fang)直至問題解決。

7. 該(gai)細胞(bao)僅供科研使用(yong)。

8. 備(bei)注:運輸用(yong)的培(pei)(pei)養基(ji) (灌液(ye)培(pei)(pei)養基(ji)) 不能再用(yong)來培(pei)(pei)養細(xi)(xi)胞(bao),請換用(yong)按(an)照說明書細(xi)(xi)胞(bao)培(pei)(pei) 養條件新(xin)配制的培(pei)(pei)養基(ji)來培(pei)(pei)養細(xi)(xi)胞(bao)。     收到細(xi)(xi)胞(bao)后(hou)第一次傳代建議(yi) 1:2 傳代。

9. 注意:  1:2 傳代就是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個(ge) T25 瓶或者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿。不(bu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個(ge)10cm 皿。

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